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原代CIK細胞培養(yǎng)體系

原代CIK細胞培養(yǎng)體系

簡要描述:
原代CIK細胞培養(yǎng)體系產(chǎn)品規(guī)格:100ml/500ml,產(chǎn)品貨號:PriMed-Biowm-039

更新時間:2025-03-26

訪問量:1450

廠商性質(zhì):經(jīng)銷商

生產(chǎn)地址:

 原代CIK細胞培養(yǎng)體系參數(shù):
    產(chǎn)品規(guī)格:100ml/500ml
  產(chǎn)品貨號:PriMed-Biowm-039
  保存溫度(℃):2-8℃/-20℃
  運輸溫度(℃):2-8℃/-20℃
  凍存培養(yǎng)基:
  凍存細胞時必須使用的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的凍存培養(yǎng)基。
  1)細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型凍存培養(yǎng)基,其含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化,可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。
  2)凍存培養(yǎng)基是一種化學成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基,含10% DMSO,適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
  培養(yǎng)細胞凍存方案:
  以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案,必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。
  1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲存,直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于用細胞系。
  2.凍存貼壁細胞時,利用傳代時用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞需培養(yǎng)基重新懸浮細胞。
  3.采用血球計數(shù)器、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)需活細胞密度,計算凍存培養(yǎng)基需要量。
  4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動細胞沉淀。
  注:離心速度和時間取決于細胞種類。
  5.用預冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀,將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度。
  6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時,應不時輕輕混合細胞,使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
  7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞,使溫度每分鐘大約降低  1°C。或者,將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下*。
  實驗材料:
  1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
  2. 100ml滅菌燒杯2個; 人皮膚成纖維細胞,CCC-HSF-1細胞
  3、50ml離心筒2個
  4、滅菌培養(yǎng)皿1個,細胞培養(yǎng)瓶1個
  5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個;無菌玻璃攪拌棒1個
  6、細胞計數(shù)板1塊;
  7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把;
  8、酒精燈1臺;
  實驗報告:
  一、分離與培養(yǎng):
  1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,*將組織剪成1mm3左右大小;
  2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
  3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織被消化;
  4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
  5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
  二、免疫熒光:
  1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
  2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
  3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
  4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞*;
  5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
  6、用PBS沖洗3次,每次10min,*在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
  細胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
  1.研究的對象是活細胞
  在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結構、生命活動等。
  2.研究條件可以人為控制
  pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
  3.研究的樣本可以達到比較均一性
  通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
  4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
  采用各種研究技術:如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。

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