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人慢性骨髓性白血病細胞

人慢性骨髓性白血病細胞

簡要描述:
細胞簡介
1)來源:骨髓
2)形態(tài):淋巴母細胞樣;圓形,懸浮生長
3)含量:>1x106 細胞數(shù)
4)規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
5) 用途:僅供科研使用。

更新時間:2025-04-02

訪問量:699

廠商性質(zhì):經(jīng)銷商

生產(chǎn)地址:

                           人慢性骨髓性白血病細胞

(K-562)

細胞介紹

該細胞是由Lozzio從一名53歲的慢性髓細胞性白血病急變期的女性患者的胸水中分離建立的。該細胞曾被認為來源于粒系,處于高度未分化階段;Anderson等人作了細胞膜特性的研究后,認為該細胞是紅白血病細胞系。該細胞是對自然殺傷細胞高度敏感的體外靶標,故而被廣泛應用于這方面的研究。K562的原始細胞是一種具有多向分化潛能的造血系統(tǒng)的惡性腫瘤細胞,能自發(fā)分化為紅系、粒系和單核系的可辨識的祖細胞。該細胞表達CD7(25%)。

細胞特性

1)來源:骨髓

2)形態(tài):淋巴母細胞樣;圓形,懸浮生長

3)含量:>1x106 細胞數(shù)

4)規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

5) 用途:僅供科研使用。


運輸和保存:干冰運輸及復蘇好存活細胞:(1)1mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。(2)T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

細胞接收后的處理:

1) 收到細胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯(lián)系我們。

2)請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài),同時給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。

3) 懸浮細胞:T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中(加入按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基)。

4)備注:運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞,請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代 。

           

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:

1)準備IMDM(推薦BWM-0008)培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%。

2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

二.細胞處理:

1)凍存細胞的復蘇::

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:

懸浮狀態(tài)下生長的細胞,可以通過向培養(yǎng)瓶中添加培養(yǎng)基來維持細胞的生長狀態(tài),一般情況下細胞密度維持在1×105~1×106個/mL(不同細胞對密度要求不同,)可以維持細胞的正常生長。如需分瓶可以將細胞懸液收集到離心管中1000rpm,離心5min,棄去上清,補加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3)細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面T25瓶為例;

1.細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中,可使用血球計數(shù)板計數(shù),來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細胞/ml.

2.1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ,按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中,標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3.將要凍存的細胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。


注意事項:

1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意:凍存管浸沒在液氮中會泄漏,并會慢慢充滿液氮。解凍時,液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子,從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害。






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